甲氨蝶呤拥有广谱抗肿瘤活性，可单独使用或与其它化疗药物结合使用。具体适应症如下：
1. 抗肿瘤医治，单独使用：乳腺癌、怀胎性绒毛膜癌、恶性葡萄胎或葡萄胎。
2. 抗肿瘤医治，结合使用：急性白血。ǔ龈袷羌毙粤馨拖赴园籽。urkitts 淋巴瘤、晚期淋巴赘瘤（III 和IV 期，据Peter 吩熠法）和晚期蕈样霉菌病。
3. 鞘内注射：医治脑膜转移癌（只能使用等渗造剂）。
4. 大剂量医治：大剂量甲氨蝶呤单独利用或与其它化疗药物结合利用医治下列肿瘤：成骨赘瘤、急性白血病、支气管肺癌或头颈部表皮癌。大剂量甲氨蝶呤利用时，必须利用亚叶酸进行援救。亚叶酸是四氢叶酸酯的衍生物，可与甲氨蝶呤竞争进入细胞内。这种“亚叶酸援救”可在大剂量甲氨蝶呤利用时；ふＷ橹赴馐芮趾。
5. 银屑病化疗：甲氨蝶呤可用于医治对通例疗法不敏感的严沉、固执、致残性银屑病。但因使用时有较大危险，应在经度日检和/或皮肤科医生会诊明确诊断后使用。